Применение новых диагностических критериев в диагностике пигментных новообразований. FISH- реакция.

Автор:

• 

  Ильина Екатерина Эдуардовна

  дерматовенеролог, дерматокосметолог, к.м.н.

Существенный сдвиг в онкологии произошел и в связи с обнаружением опухолевых антигенов.

Так, по мнению, некоторых зарубежных авторов (Kimberly A. Wenner, MD, Assistant Chief of Dermatology, Madigan Army Medical Center) известно, что для множественных диспластичеких невусов с прямым фактором наследования и зависимости развития на их фоне меланомы - характерна мутация в трех антигенах: CDK2NA (9p21), CDK4 (12q14) и CMM1(1p).

В связи с этим, нас заинтересовала цель – применить в клинической практике реакцию Флюоресцентной in situ гибридизации (FISH – реакция) в диагностике онкологических заболеваний, а частности, сравнить 3 группы пациентов с меланомой, с простыми невусами и диспластическими невусами трех степеней дисплазии меланоцитов.

В настоящее время ОАО «ИПХиК» отделением патоморфологии и дерматокосметологии и Институтом Онкологии, отделением патанатомии проводятся лабораторные исследования на гистологических срезах перечисленных выше новообразований, полученных у больных при хирургическом удалении, с целью определения специфических ДНК - последовательностей на хромосомах.

Цитогенетическая техника или FISH – Fluorescent in situ hybridization была разработана в середине 80 годов и используется для детекции локализации присутствия или отсутствия специфических ДНК – последовательностей на хромасомах.

С этой целью используются флюоресцентные пробы, связывающиеся только с теми участками хромосом, с которыми у них имеется высокой степени общность последовательностей.

В практическом исполнении FISH реакция выглядит следующим образом, некий исследуемый материал, содержащий ДНК, подвергается обработке для частичного разрушения ее молекулы с целью разрыва двухцепочной структуры и тем самым облегчения доступа к искомому участку гена. Пробы классифицируются по месту присоединения к молекуле ДНК. Материалом для FISH реакции в клинической практике служат парафиновые срезы тканей, мазки и отпечатки.

Таким образом, FISH реакция позволяет находить произошедшие изменения в молекуле ДНК в результате увеличения числа копий гена, потери гена, изменения числа хромосом и качественные изменения – перемещения локусов генов как в одной и той же хромосоме, так и между двумя хромосомами.

Нами за период с 2000 по 2011 год в ОАО «ИПХ и К» наблюдалось 526 пациентов детского и подросткового возраста с диспластическими невусами, с врожденными гигантскими невусами на фоне которых был обнаружен диспластический невус трех степеней дисплазии (меланоцитов). Для нашего исследования среди них были отобраны группы пациентов со следующими диагнозами: 1. «невусы»- включая простые внутридермальные невусы и средние пигментные невусы, 2. диспластические невусы 3-х степеней дисплазии меланоцитов и 3. группа пациентов с меланомой 21 человек (Акад..Корцеладзе А. И. , Институт Онкологии).

Для обработки полученных данных при применении FISH –реакции и изучения зависимости между копийностью генов 3-х исследумых групп мы использовали коэффициент корреляции Спирмена.

В таблице приведены значения коэффициента корреляции Спирмена для 4 генов. Все рассчитанные коэффициенты корреляции Спирмена являются статистически значимыми (p<0.05).